一、檢測原理及技術

　　1、電學檢測原理及技術

　?、匐娮杩狗ㄔ?/p>

　?、趦x器的組成和功能

　　信號發生器

　　放大器

　　閾值調節器

　　甄別器

　　整形器

　　計數器

　　放大→閾值調節→甄別→整形→計數

　?、垭娮杩乖磉M行血細胞計數和分類原理圖

　　特點：是Z早的血細胞計數理論

　　缺點：不能對單個細胞進行系統分析，得出的參數為群體平均值。

　　2、射頻電導法

　　射頻指射頻電流，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。電導性即電的傳送性能。高頻電流能通過細胞壁,滲入細胞膜脂質層可測定細胞的導電性，提供細胞內部化學成分、細胞核和細胞質、顆粒成分等特征性信息。

　　用途：特別有助于鑒別體積雖相同、但內部結構性質不同的細胞（或相似體積的顆粒）。

　　3、光（化）學檢測原理

　　激光散射法

　?、僭恚禾幚砑毎ㄏ♂?、染色、球形化）→ 通過石英毛細管（激光束照射）→ 細胞產生與其特征相應的各種角度的散射光 → 周圍有不同角度的信號檢測器

　　不同結果角度代表的意義如下：

　　前向散射光（FSC）:數量和表面體積大小

　　側向散射光（SSC）:顆粒、細胞核等復雜性

　　散射熒光（FL）:FL1綠色，FL2橘紅色，FL3紅色

　　激光散射法是現代五分類血液分析儀的主要檢測原理之一。

　?、诨窘M成

　　光源：氣體激光（氦-氖、氬氣等）、固體激光（半導體）、鎢光源（多色光）

　　鞘流：維持顆粒于液流中央，順序、單個、恒速向前流動，即流體動力學聚焦

　　細胞懸液：被檢測細胞（顆粒）的懸液，由氣壓導入流動池

　　光檢測器：接受來自各種角度的散射光或吸收光信號，并轉換成相應特征的電信號

　　功能水平上對單個細胞進行定量分析，可高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，是Z先進的細胞定量分析技術。

　?、劬W織紅細胞檢測原理

　　利用流式細胞儀（flow cytometer,FCM）的方法進行網織紅細胞計數。因網織紅細胞的胞質中尚殘留RNA,可與丫啶橙、哌若寧-Y、噻唑橙等染料結合，應用FCM測量發出的特定顏色熒光，進行RNA定量。

　　分光光度法

　?、僭恚鹤裱璍ambert-Beer比色定律，即吸光度A與液體物質濃度C成正比。

　?、诮M成：單色光源、檢測池和比色容器、光檢測器。

　?、垩t蛋白測定：溶血劑→ 紅細胞溶解 → Hb → 與溶血劑中某些成分結合 → 穩定的血紅蛋白衍生物 → 530～550nm → 比色。

　　4、不同的儀器組合應用電學、光、化學檢測技術

　　血液分析儀常用檢驗參數的原理和技術

　　白細胞五分類計數及相關參數檢測

　?、龠^氧化物酶（peroxidase）染色通道檢測原理

　?、隗w積、電導和光散射（VCS）法

　　VCS：Volume，Conductivity，lightScatter

　　電阻抗技術 →細胞體積、數量

　　電導技術→ 內部結構性質不同的細胞

　　光散射技術 →細胞內的顆粒性、核分葉性、核表面結構

　　VCS技術下各種白細胞群的特征

　?、鄱嘟嵌绕窆馍⑸浞ǎ∕APSS）

　　血標本經鞘液稀釋后→WBC近似自然狀態→Hb溢出，鞘流水分子則進入RBC →不干擾白細胞檢測→多角度偏振光散射法分4個角度檢測

　　0°：反映細胞大小，同時檢測細胞數量

　　7°：反映細胞內部結構及核染色質的復雜性。

　　90°：反映細胞內部顆粒及分葉狀況。

　　90°D：在光散射過程中，嗜酸性粒細胞顆粒豐富，可去偏振光，與中性粒細胞鑒別。

　　優點：可鑒別白細胞亞群、異常細胞類型；白細胞分類不受有核紅細胞、血小板凝聚、不溶解紅細胞和細胞碎片等干擾物質影響。

　　成熟紅細胞系列參數檢測原理

　　電阻抗法

　　流式細胞術、鞘流電阻抗法

　　流式細胞術激光散射法

　　電阻抗法和光散射法

　　血小板系列參數檢測原理

　　電阻抗法

　　流式細胞激光核酸熒光染色和電阻抗法

　　激光散射法

　　固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法

　　網織紅細胞系列參數檢測原理

　　非熒光染料染色法：新亞甲藍

　　熒光染料染色法：噁嗪、堿性槐黃O、聚次甲基、噻唑橙、氧氮雜芑750等。

　　有核紅細胞系列參數檢測原理

　　VCS法

　　流式激光/熒光染色法

　　白細胞計數和分類通道衍生法

　　阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細胞術